elisa檢測試劑盒標本收集保留不妥致細菌污染，菌體中也許富含內源性HRP，會發生假陽性反響；標本在冰箱中保留時刻過長致使血清IgG聚合，易使間接法的實驗本底加深。因而，標本宜在新鮮時檢查。
ELISA試劑盒實驗在必定溫度下的反響時刻并不是反響的結尾，溫育時刻過短、溫度過低，易致顯色不全；溫育時刻過長、溫度過高，易致非特異性緊附于反響孔周圍，難以清潔*，發生陰性高值或假陽性反響。要嚴厲按規則的溫度和溫育時刻進行。
假如參加的酶物過多或加在較高的孔壁上或孔口，也會致使本底添加或假陽性。水浴箱門，嚴厲控制水浴的溫度為37±0.5。同時，微孔板不可堆疊放置，以確保傳熱均勻，各板的溫度都能敏捷到達平衡。
當標本收集保留不妥發生溶血時，紅細胞中的血紅蛋白釋放到血清中，血紅蛋白具有過氧化物酶的性質，其通過吸附或“PP效應"（蛋白質間相互吸附的景象）后，可催化A、B液顯色而形成假陽性。
因為試劑盒一般設定的反響溫度為37度，在這個溫度下溫育必定時刻，蒸騰的水分會許多，關于全部反響系統來講，各種反響物的濃度會不斷地添加，這么必會致使反響zui終的值添加。
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